雅安藏茶從屬于四川邊茶，主銷西藏等邊疆地區(qū)，邊疆少數(shù)民族有“寧可三日無(wú)食，不可一日無(wú)茶”的說(shuō)法，可見，四川邊茶在邊疆少數(shù)民族生活中的重要地位。姜波等研究表明，貯存有一定時(shí)期的四川邊茶其抑制脂肪酸合酶活性的效果隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷增加，說(shuō)明貯存過(guò)程會(huì)影響藏茶的品質(zhì)。而貯存過(guò)程中品質(zhì)的變化也與微生物的種群有一定的關(guān)系，研究藏茶貯存過(guò)程中的真菌微生物種群，對(duì)藏茶貯存方法的改進(jìn)及品質(zhì)提高具有重要意義。因此，本試驗(yàn)對(duì)藏茶進(jìn)行了貯存過(guò)程中的真菌分類學(xué)地位鑒定，以期為藏茶貯存過(guò)程中品質(zhì)變化的機(jī)理提供生物學(xué)方面的理論參考，為貯存時(shí)期安全保存及促進(jìn)品質(zhì)的轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)。
1、材料與方法
1．1材料藏茶由四川雅安市茶葉有限公司提供。
1．2試驗(yàn)方法1．2．I培養(yǎng)基的配制參照《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》進(jìn)行馬丁(Martin)孟加拉紅鏈霉素瓊脂培養(yǎng)基的配制。
1．2．2真菌的分離純化1)微生物菌懸液梯度的制備參照按GB／T4789．2—2o03《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》l5進(jìn)行；2)微生物的分離培養(yǎng)采用馬丁(Martin)孟加拉紅鏈霉素瓊脂培養(yǎng)基37℃下黑暗培養(yǎng)，采用平板涂布法；3)微生物的純化培養(yǎng)參照《中國(guó)真菌志》[6的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法：察貝克瓊脂培養(yǎng)基(cYA)25。C下黑暗培養(yǎng)7d。1．2．3真菌的分類鑒定按照《微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》《中國(guó)真菌志》。和《真菌鑒定手冊(cè)》進(jìn)行真菌鑒定。
2、結(jié)果與分析
通過(guò)對(duì)雅安藏茶貯存過(guò)程中存在的真菌種群進(jìn)行分類學(xué)地位鑒定，共發(fā)現(xiàn)1類曲霉菌、3類青霉菌及1類根霉菌。其中，曲霉菌是藏茶中的優(yōu)勢(shì)類群。2．1曲霉菌(Aspergillusniger)黑曲霉是一種低等真核生物，屬于半知菌亞門(Deuteromyeotina)、絲孢綱(Hyphomycetes)、絲孢目(Hyphomycetales)、叢梗孢科(Moniliaceae)、曲霉屬(Aspergillus)，是世界公認(rèn)的安全可食用性菌種，在工業(yè)生產(chǎn)和學(xué)術(shù)研究中占有重要的地位。作為參與藏茶貯存過(guò)程中品質(zhì)形成的重要菌種，足藏茶貯藏過(guò)程中數(shù)量最多的一類微生物，研究其生命周期及其代謝產(chǎn)物變化有著重要意義。從藏茶貯存過(guò)程中分離的黑曲霉形態(tài)結(jié)構(gòu)(圖1)看出，黑曲霉的菌落在cYA(察貝克瓊脂培養(yǎng)基)上生長(zhǎng)迅速，25C下培養(yǎng)7d后，直徑為50～70mm，少數(shù)菌株生長(zhǎng)較局限，多數(shù)生長(zhǎng)較快，菌落平坦或中心稍凸起，有規(guī)則或不規(guī)則的輻射狀溝紋，質(zhì)地絲絨狀或稍呈絮狀，有的菌株偶有過(guò)度生長(zhǎng)現(xiàn)象，產(chǎn)生大量分生孢子，表面呈暗褐黑色至炭黑色；滲出液有或無(wú)，無(wú)色；具或不具霉味。菌落反面無(wú)色或呈不同程度的黃色、黃褐色或帶微黃綠色。分生孢子頭初為球形至輻射形，分生孢子球形或近球形。較多，分生孢子面的邊緣呈現(xiàn)藍(lán)綠色，菌絲體淡灰白色，滲出液缺乏，可溶性色素缺乏。2．2．3巴恩正青霉菌(Baenpenicillium)巴恩正青霉菌形態(tài)結(jié)構(gòu)如圖4所示，巴恩正青霉菌在CYA上25C培養(yǎng)7d后，直徑25～36mm，規(guī)則或不規(guī)則的放射狀皺紋較多或大量產(chǎn)生，中心有或無(wú)臍狀突起；質(zhì)地絨狀兼絮狀和顆粒狀；分生孢子結(jié)構(gòu)通常稀少或很少，不影響菌落面的顏色，偶有分離物則較多，分生孢子面暗灰綠色，近于灰橄欖色；菌絲體白色至微黃色或灰白色；閉囊殼大量產(chǎn)生；滲出液大量產(chǎn)生，淡黃色，偶有缺乏者；反面磚紅色、橘褐色、黃褐色；可溶性色素缺乏。
2．2青霉菌(Penicillium)青霉屬青霉多數(shù)種在生活史中只具有無(wú)性階段，僅少數(shù)種部分存在有性階段。藏茶貯存過(guò)程中主要有光孢青霉菌、婁地青霉菌和巴恩正青霉菌出現(xiàn)。2．2．1光孢青霉菌(Penicillium glabrum)光孢青霉菌形態(tài)結(jié)構(gòu)如圖2所示，光孢青霉菌在CYA上25℃培養(yǎng)7d后，直徑38～55rnm，具放射狀皺紋，質(zhì)地絨狀；分生孢子大量產(chǎn)生，分生孢子面灰綠色，菌絲體白色，偶有分離物產(chǎn)生，可溶性色素缺乏。2．2．2婁地青霉菌(Penicilliu mroqueforti)婁地青霉菌形態(tài)結(jié)構(gòu)如圖3所示，婁地青霉菌在CYA上25℃培養(yǎng)7d后，直徑45～65mlTl，有少量放射狀皺紋，中央有臍狀突起而其他部分平坦，邊緣較薄且不規(guī)則；質(zhì)地絨狀，中心有輕微絮狀；分生孢子結(jié)構(gòu)2．3根霉菌(Rhizopus)根霉屬接合菌亞門(Zygomycotina)、接合菌綱(Zygomycetes)、毛霉目(Mucorales)、毛霉科(Mu—cot)。除細(xì)菌以外，根霉是迄今為止絲狀菌中產(chǎn)L一乳酸的另一重要菌種。從藏茶貯存過(guò)程中分離的菌體顯微照相如圖5所示。根霉菌產(chǎn)生有性孢子，菌體單細(xì)胞或絲狀，無(wú)隔膜，常多核；無(wú)性階段的孢子為不動(dòng)的孢囊孢子或與分生孢子相似的孢子囊。腐生，無(wú)性孢子主要為生在孢子囊中的孢囊孢子或與分生孢子相似的孢子囊(即毛霉目特征)，不形成子實(shí)體；孢子囊相似，都具有囊軸，孢子囊壁薄，孢囊孢子由孢子囊壁破裂后釋出(為毛霉科特征)。孢子囊不作燒瓶狀，孢子囊都為球形，孢子囊沒有中軸基，孢囊梗在假根的對(duì)面，從匍匐菌絲生出。
3、小結(jié)與討論
藏茶貯存過(guò)程中存在的微生物是一個(gè)復(fù)雜的體系，各種微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中分泌胞外酶將大分子物質(zhì)降解成可溶性的小分子物質(zhì)，并為自身的生長(zhǎng)代謝提供氮源、碳源等。1)黑曲霉可產(chǎn)生多種酶類，如果膠酶、葡萄糖淀粉酶、纖維素酶、柚苷酶、單寧酶、葡萄糖氧化酶、糖苷酶等。其中，葡萄糖淀粉酶、纖維素酶和果膠酶，可以分解多糖、脂肪、蛋白質(zhì)、天然纖維、果膠和水不溶性化合物等有機(jī)物。水解產(chǎn)物大多為單糖、氨基酸、水化果膠和可溶性碳水化合物。黑曲霉產(chǎn)生的單寧酶可分解茶葉中的單寧，解除單寧對(duì)于后續(xù)微生物的抑制起到重要作用，同時(shí)纖維素酶、果膠酶等酶類分解茶葉中的高分子碳水化合物，增加藏茶溶出物，對(duì)藏茶甘醇品質(zhì)的形成起關(guān)鍵作用。2)青霉產(chǎn)生多種酶類及有機(jī)酸，可生產(chǎn)葡萄糖氧化酶或葡萄糖酸、檸檬酸、檸檬酸霉素和抗壞血酸。且青霉素發(fā)酵中的菌絲廢料含有豐富的蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和B類維生素；產(chǎn)黃青霉代謝產(chǎn)生的青霉素對(duì)雜菌、腐敗菌可能有良好的消除和抑制生長(zhǎng)作用，因此，對(duì)藏茶醇和品質(zhì)的形成可能有輔助作用。3)根霉的淀粉酶、果膠酶活力較高，能產(chǎn)生有機(jī)酸，還能產(chǎn)生芳香類物質(zhì)，也能轉(zhuǎn)化甾醇族化合物的重要菌類。在藏茶中生成一定數(shù)量的根霉，有利于藏茶甜香品質(zhì)的形成。等礦質(zhì)元素的消耗較大,因此,AM真菌對(duì)礦質(zhì)元素吸收的促進(jìn)效應(yīng)有利于牡丹開花。AM真菌對(duì)P和Ca的促進(jìn)效應(yīng)最重要,這是由于我國(guó)農(nóng)田土壤中有效磷濃度低,而Ca可顯著促進(jìn)牡丹的光合作用,AM真菌改善植物礦質(zhì)元素營(yíng)養(yǎng)的作用已得到廣泛認(rèn)可,尤其是P元素,AM真菌改善植物P營(yíng)養(yǎng)的效應(yīng)是AM真菌與植物共生關(guān)系中最重要的基礎(chǔ),也是AM真菌所具有的各種作用中最顯著和穩(wěn)定的,其他礦質(zhì)元素對(duì)菌根植物的效應(yīng)或機(jī)理的研究還不夠全面或穩(wěn)定本研究使用的是混合菌劑,研究表明,接種混合菌劑比單一菌劑對(duì)幼苗促進(jìn)效果更顯著,而且可以擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。牡丹作為觀花植物,AM真菌對(duì)其開花的促進(jìn)效應(yīng)為重要,由于牡丹為多年生木本植物,AM直菌對(duì)其開花的影響研究周期較長(zhǎng),因此,有待對(duì)AM菌對(duì)牡丹開花的直接效應(yīng)以及不同菌種之間的差異作進(jìn)一步研究。
出處：《貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)》2010年38卷
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